VALUTAZIONE QUANTITATIVA DI MALATTIA MINIMA NEL MIDOLLO E NEL SANGUE PERIFERICO DI PAZIENTI CON RABDOMIOSARCOMA MEDIANTE TECNICA DI REAL TIME PCR

Introduzione e scopo. Il Rabdomiosarcoma (RMS), tumore
a piccole cellule rotonde blu, è il più comune sarcoma dei
tessuti molli pediatrici. In circa 20% dei casi si presenta con
malattia diffusa alla diagnosi e le sedi più frequentemente
coinvolte sono polmoni, linfonodi e midollo osseo (BM).
Attualmente, l’infiltrazione midollare di cellule di RMS è
rilevata dall’ analisi morfologica dell’ aspirato midollare e/o
delle biopsie osteo-midollari. Questi metodi tuttavia non
riescono a rilevare un’infiltrazione neoplastica inferiore al
5%. Sulla base delle caratteristiche cliniche e biologiche del
RMS, abbiamo standardizzato un metodo quantitativo di
RT-PCR basato sul marcatore RMS-specifico MyoD1, al
fine di studiare la malattia minima disseminata(MMD) in
bambini con RMS. Materiali e metodi. Abbiamo condotto
studi di RT-PCR quantitativa relativa per il gene MyoD1
mediante tecnologia TaqMan. I primers specifici per
MyoD1 e la sonda sono stati individuati usando il software
specifico Primer Express (Applied Biosystems). GUS è
stato utilizzato come gene housekeeping ossia come controllo
endogeno per ogni campione. Risultati. Abbiamo studiato
il BM alla diagnosi di 39 pazienti affetti da RMS. La
metodica è di facile applicazione ed unisce l’alta sensibilità
alla specificità. MMD era positiva in 17/39 pazienti. I livelli
di espressione di MyoD1 in 7/17 campioni, positivi anche
mediante RT-PCR qualitativa, hanno mostrato valori di Ct
che variavano in un range da 21 a 27, mentre in 10 casi,
negativi in RT-PCR, il valore di Ct era superiore a 35. In 14
pazienti abbiamo potuto studiare la malattia minima anche
nel sangue periferico. 10/14 sono risultati positivi con valori
di Ct in un range da 35 a 38, indipendentemente dalla
positività midollare. Conclusioni. Questi risultati preliminari
suggeriscono che il coinvolgimento midollare alla diagnosi
è discretamente frequente in pazienti con RMS e che
la MMR può essere rilevata, anche se a livelli molto bassi,
nel sangue periferico indipendentemente dall’infiltrazione
midollare.