Data di Pubblicazione:
2006
Abstract:
Il gene Bin1 dà origine a proteine derivanti da splicing alternativo
che interagiscono con c-Myc ed hanno un ruolo di soppressori
tumorali. Esse inibiscono la trasformazione cellulare
Myc-mediata e promuovono l’apoptosi in linee cellulari tumorali.
Scopo di questo studio è la valutazione di espressione del
trascritto Bin1 in biopsie di rabdomiosarcoma (RMS) rispetto
al muscolo scheletrico fetale, di analizzarne l’espressione sia
a livello trascrizionale che proteico in linee cellulari di RMS e
di esaminare il possibile ruolo di Bin1 nella biologia di questo
tumore. Abbiamo valutato il livello di espressione di Bin1
mediante Sybr Green real time PCR in sei biopsie e successivamente
in linee cellulari di RMS (RH30, RH4, RH28, RC2,
RD, CCA, SMS). In quest’ultime, trascritti contenenti l’esone
10, caratteristico di isoforme muscolo-associate è stata analizzata
mediante RT-PCR di una porzione centrale di Bin1.
Inoltre mediante RT-PCR, PCR e sequenziamento dopo clonaggio
si sono individuati i diversi trascritti in RC2, RH30 e
RD. Lo studio dell’espressione proteica di Bin1 è stato effettuato
tramite tecniche di Western-blot e immunofluorescenza
su preparati citologici. I risultati ottenuti tramite PCR quantitativa
hanno confermato la sottoespressione di Bin1sia nelle
biopsie che nelle linee cellulari di RMS. L’espressione di trascritti
caratterizzati dalla presenza dell’esone 10 è stata rinvenuta
in tutte le linee e tramite clonaggio e sequenziamento
si è rilevata la presenza di sette diverse isoforme nelle 3 linee
cellulari esaminate. Tra queste abbiamo identificato isoforme
ubiquitarie e muscolo-associate, che da precedenti lavori sembrano
caratterizzate da un’attività anti-tumorale, trascritti
derivanti da splicing aberrante e trascritti la cui funzione non
è nota. Dati preliminari confermano la presenza delle isoforme
proteiche ubiquitarie e muscolo-associate in tutte le 7 linee
cellulari. Lo studio in immunofluorescenza di RD, RH30, RH4
dimostra la localizzazione prevalentemente nucleare di Bin1.
In base a questi risultati intendiamo procedere alla trasfezione
di alcune isoforme in cellule RH30 e RD per valutare il possibile
ruolo anti-apoptotico di Bin1, di controllo del ciclo cellulare
e/o differenziamento al fine di comprendere le conseguenze
della sottoespressione di Bin1 nel RMS
che interagiscono con c-Myc ed hanno un ruolo di soppressori
tumorali. Esse inibiscono la trasformazione cellulare
Myc-mediata e promuovono l’apoptosi in linee cellulari tumorali.
Scopo di questo studio è la valutazione di espressione del
trascritto Bin1 in biopsie di rabdomiosarcoma (RMS) rispetto
al muscolo scheletrico fetale, di analizzarne l’espressione sia
a livello trascrizionale che proteico in linee cellulari di RMS e
di esaminare il possibile ruolo di Bin1 nella biologia di questo
tumore. Abbiamo valutato il livello di espressione di Bin1
mediante Sybr Green real time PCR in sei biopsie e successivamente
in linee cellulari di RMS (RH30, RH4, RH28, RC2,
RD, CCA, SMS). In quest’ultime, trascritti contenenti l’esone
10, caratteristico di isoforme muscolo-associate è stata analizzata
mediante RT-PCR di una porzione centrale di Bin1.
Inoltre mediante RT-PCR, PCR e sequenziamento dopo clonaggio
si sono individuati i diversi trascritti in RC2, RH30 e
RD. Lo studio dell’espressione proteica di Bin1 è stato effettuato
tramite tecniche di Western-blot e immunofluorescenza
su preparati citologici. I risultati ottenuti tramite PCR quantitativa
hanno confermato la sottoespressione di Bin1sia nelle
biopsie che nelle linee cellulari di RMS. L’espressione di trascritti
caratterizzati dalla presenza dell’esone 10 è stata rinvenuta
in tutte le linee e tramite clonaggio e sequenziamento
si è rilevata la presenza di sette diverse isoforme nelle 3 linee
cellulari esaminate. Tra queste abbiamo identificato isoforme
ubiquitarie e muscolo-associate, che da precedenti lavori sembrano
caratterizzate da un’attività anti-tumorale, trascritti
derivanti da splicing aberrante e trascritti la cui funzione non
è nota. Dati preliminari confermano la presenza delle isoforme
proteiche ubiquitarie e muscolo-associate in tutte le 7 linee
cellulari. Lo studio in immunofluorescenza di RD, RH30, RH4
dimostra la localizzazione prevalentemente nucleare di Bin1.
In base a questi risultati intendiamo procedere alla trasfezione
di alcune isoforme in cellule RH30 e RD per valutare il possibile
ruolo anti-apoptotico di Bin1, di controllo del ciclo cellulare
e/o differenziamento al fine di comprendere le conseguenze
della sottoespressione di Bin1 nel RMS
Tipologia CRIS:
01.05 - Abstract in rivista
Elenco autori:
Albiero, G; Bonvini, P; Sartori, F; Carli, M; Lanfranchi, Gerolamo; Rosolen, Angelo
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