ATTIVITÀ ANTITUMORALE DELL’INIBITORE DELLE CDK, FLAVOPIRIDOLO, IN CELLULE DI ALCL IN VITRO

Il ciclo cellulare è un processo finemente regolato dall’attività
di enzimi noti come cdk (cyclin-dependent kinases). La
sovraespressione delle cdk è spesso associata alla trasformazione
e progressione neoplastica, tanto che inibitori competitivi
dell’attività delle cdk hanno recentemente dimostrato
una promettente attività antitumorale in vitro ed in vivo. In questo
studio abbiamo valutato l’attività antitumorale di un inibitore
delle cdk, Flavopiridolo, su linee di Linfoma Anaplastico
a Grandi Cellule (ALCL), una neoplasia che rappresenta il
20% dei linfomi a grandi cellule dell’infanzia, ed è caratterizzata
dalla sovraespressione di proteine associate alla proliferazione
cellulare. Linee cellulari rappresentative dell’istotipo
ALK-positivo (KARPAS299, SR786, SUDHL1) e ALK-negativo
(FE-PD) sono state utilizzate come modello sperimentale.
L’attività citotossica di Flavopiridolo è stata valutata in vitro
mediante MTT test. L’analisi del ciclo cellulare è stata fatta al
citofluorimetro. La cinetica di espressione e localizzazione
delle proteine coinvolte nei meccanismi apoptotici è stata
valutata mediante Western blot e immunofluorescenza. L’inibizione
trascrizionale indotta da Flavopiridolo è stato determinata
mediante RT-PCR. I dati ottenuti nel nostro laboratorio
dimostrano per la prima volta che Flavopiridolo ha un marcato
effetto antiproliferativo e citotossico sulle cellule di
ALCL, ed è in grado di indurre l’80-90% di inibizione della
crescita quando somministrato a concentrazioni nanomolari
(100-200nM). Analisi morfologiche e biochimiche hanno confermato
l’abilità di Flavopiridolo di indurre l’accumulo delle
cellule di ALCL in fase sub G1; perdita dell’integrità strutturale
nucleare; riduzione dei livelli di espressione di proteine
necessarie per la sopravvivenza e la proliferazione delle cellule
neoplastiche (Akt, XIAP, Mcl-1, PARP), sia a livello trascrizionale
(per inibizione dell’attività della RNA polimerasi II)
che posttraduzionale (previa attivazione delle caspasi-3, -8 e
-9). Questo studio dimostra per la prima volta la capacità antiproliferativa
di Flavopiridolo, attraverso il blocco del ciclo cellulare
e l’attivazione di meccanismi apoptotici in cellule di
ALCL rappresentative dell’istotipo tumorale ALK-positivo e -
negativo.